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    江苏十五选五开奖图:[茉莉花茶提取液對部分免疫效應的影響]

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    ·1428·中國病理生理雜志Chinese Journal of Pathophysiology 2011,27(7):1428-1430

    文章編號]1000-4718(2011)07-1428-03

    茉莉花、茉莉花茶提取液對部分免疫效應的影響

    112

    密,蔣昀靚,鄺曉聰△,秦

    333箐△,歐冰凝,李海東

    32

    (1廣西衛生管理干部學院,廣西醫科大學病理生理教研室,化學教研室,廣西南寧530021)

    [摘要]目的:觀察茉莉花茶提取液和茉莉花提取組分對脾淋巴細胞轉化及中性粒細胞增殖活性的影響,

    為茉莉花茶和茉莉花的應用提供前期研究數據。方法:采用水提法制作茉莉花茶浸出液,采用石油醚浸泡制備茉莉花脫腦油并進行柱層析分離。采用脾淋巴細胞轉化實驗與中性粒細胞吞噬實驗檢測茉莉花茶浸出液的免疫調另外采用淋巴細胞增殖法(MTT 法)測定茉莉花脫腦油和茉莉花提取組分B -Ⅱ的免疫激活作用。結果:節效應,

    (1)茉莉花茶浸出液能明顯提高小鼠淋巴細胞轉化率,但對中性粒細胞吞噬率無明顯影響。(2)MTT 證實茉莉花脫腦油和B -Ⅱ能促進小鼠淋巴細胞生長。結論:茉莉花茶浸出液、茉莉花脫腦油和B -Ⅱ具有一定的免疫促進效應。

    [關鍵詞]茉莉花;茉莉花茶;淋巴細胞轉化率;免疫效應[中圖分類號]R363

    [文獻標識碼]A

    doi :10.3969/j.issn.1000-4718.2011.07.034

    Effects of jasmine and jasmine tea extracts on functions of mouse immune cells

    WANG Mi 1,JIANG Yun -liang 1,KUANG Xiao -cong 2,QIN Jing 3,OU Bing -ning 3,LI Hai -dong 3

    23

    (1Health Management Institute of Guangxi ,Department of Pathophysiology ,Department of Chemistry ,Guangxi Medical U-

    niversity ,Nanning 530021,China.E -mail :bskxc @yahoo.com.cn ;qqxx [email protected].com )

    [ABSTRACT ]AIM :To observe the effects of jasmine and jasmine tea extracts on the transformation of mouse spleen lymphocytes as well as on the proliferative activity of mouse neutrophil granulocytes.METHODS :The leachate of jasmine tea was made using water extraction.The jasmine essential oil was prepared by petroleum ether soaking and the parallel column chromatography.Mouse spleen lymphocytes were used to perform the transformation test and the neutrophil phagocytosis was also assayed.The lymphocyte proliferation was measured to determine the immune activation effects of jas-mine essential oil and extracted component from jasmine (B -Ⅱ).RESULTS :Jasmine tea leachate evidently improved the rate of lymphocyte transformation in mice ,but had no effect on the rate of neutrophil phagocytosis.The jasmine essen-tial oil and the component B -Ⅱpromoted the growth of mouse lymphocytes.CONCLUSION :Leachate of jasmine tea ,jasmine essential oil and component B -Ⅱhave certain promoting effect on the immune system and improve the lymphocyte transformation in mice.

    [KEY WORDS ]Jasmine ;Jasmine tea ;Lymphocyte transformation rate ;Immune effect JT ),在綠茶中加入茉莉花制成的茉莉花茶(jasmine tea ,因其特有的花香味而為眾多飲茶者喜愛。國內外已有學者對茉莉花茶進行了一些研究,表明茉莉花茶可以抑制人體脂質過氧化反應,增強人體免疫功能脂

    [4]

    [1]

    [2、3]

    ,、具有抗癌降血

    [5]

    、抗動脈硬化等功效。茉莉花歷來備受人們喜愛,早

    莉花及茉莉花茶是否具有免疫調節作用進行研究,通過MTT 實驗及細胞培養技術對茉莉花作初步免疫活性篩選,觀察其體外免疫激活作用,為今后對茉莉花化學成分免疫活性的研究和開發利用提供實驗依據。

    《本草綱目》“辛熱甘溫,在明代李時珍中已有記載,稱該花中。文獻報道茉莉花的化學物質和下氣,僻穢濁,治下痢腹癖”有揮發性物質及環烯醚萜苷

    [6]

    1

    材料

    料和方法

    。目前國內、外針對茉莉花及

    [7]

    其化學成分藥用效能的研究非常少,對其研究和開發利用多局限于其精油作為添加劑在茶葉和食品方面的作用

    ,尚無

    對其在現代醫學和藥學方面的研究報道。本實驗對單純茉[收稿日期]2010-10-22

    [修回日期]2011-05-26

    1.1藥品與試劑茉莉花(由廣西石乳茶業有限公司提

    供);茉莉花茶(廣西橫縣茶協會提供);茉莉花脫腦油和B -Ⅱ(為茉莉花提取物,由廣西醫科大學化學教研室制備);外周血淋巴細胞培養液(湖南湘雅基因技術有限公司,批號為

    △通訊作者鄺曉聰Tel :0770-2851185;E -mail :[email protected].com.cn ;秦箐Tel :0770-2851185;E -mail :[email protected].com

    ·1429·

    0610290202);淋巴細胞分離液(中國醫學科學院生物工程醫學研究所);滅活金葡菌懸液;RPMI -1640培養基(Hy-Clone );MTT (Hualayuan Biotechnology )。1.2

    流式細胞儀;SP030水夾套培養箱(上海實驗儀

    器廠有限公司);MK3酶標儀(美國熱電公司);96孔細胞培

    儀器

    培養。培養結束前4-6h 加入MTT (20μL /well),低溫離心10min (2500r /min),取上清液,再加入DMSO (100μL /well ),振蕩溶解,用酶標儀于570nm 和630nm 雙波長測A 值。3統計學處理

    采用SPSS 10. 0統計軟件進行方差分析及t 檢驗。

    養板(加拿大杰特生物國際公司);YS2-H 光學顯微鏡為Ni-kon 產品。1.3

    動物SD 大鼠200-250g ,雄性;BALB /c小鼠,體重(25? 5)g ,雄性,廣西醫科大學實驗動物中心[桂動許字

    1

    結果

    茉莉花茶浸出液對中性粒細胞吞噬率與脾淋巴細胞轉化

    (2001)第001號]提供,合格證號為桂醫動字第23003號。2方法2.1

    茉莉花茶浸出液制備將10g 茉莉花茶加入100mL 90? 雙蒸水中浸泡30min 加入0. 8g NaCl 配成等滲原液,0. 22μm 微孔除菌過濾,收集濾液備用。

    2.2實驗分組(1)對照組(control ):在反應體系中加入1/5體積生理鹽水;(2)茉莉花茶A 組(JTA ):在反應體系中對應加入1/5體積的茉莉花茶原液;(3)茉莉花茶B 組(JTB ):在反應體系中對應加入1/10體積的茉莉花茶原液;(4)茉莉花茶C 組(JTC ):在反應體系中對應加入1/20體積的茉莉花茶原液。

    2.3免疫調節實驗

    ①小鼠脾淋巴細胞轉化實驗

    取BALB /c小鼠脾,撕碎,采

    用淋巴細胞分離液分離和純化脾淋巴細胞,調細胞濃度為

    率的影響

    較高濃度的茉莉花茶浸出液能明顯提高小鼠淋巴細胞

    2

    。轉化率,但對中性粒細胞吞噬率無明顯影響,見圖1、

    Figure 1.The effect of jasmine tea (JT )extract on the rate of

    ? s.n =10.neutrophil phagocytosis.x 珋

    圖1

    茉莉花茶浸出液對中性粒細胞吞噬率的影響

    1. 0? 109/L,96孔板每孔加入100μL 細胞懸液,并按2. 2的

    實驗分組按比例加入茉莉花茶原液,含PHA (植物血球凝集phytohemagglutinin )培養液中培養72h ,素,取細胞懸液制片,吉姆薩-瑞氏染色,油鏡下觀察200個細胞中轉化的淋巴細胞,計算淋巴細胞轉化率。每個實驗組為6個復孔。

    ②中性粒細胞吞噬實驗SD 大鼠腹主動脈抽取抗凝血,采用明膠生理鹽水沉淀法分離血中性白細胞,調細胞濃度為

    9

    1. 0? 10/L,取0.2mL 用血漿配制細胞懸液,加入5μL 滅活

    13

    然后根據分組按比例加入茉莉花茶金葡菌懸液(1? 10/L),

    37? 孵育30min ,Wright 染色,油鏡取細胞懸液制片,原液,

    下觀察200個中性粒細胞吞噬細菌的情況,計算吞噬率,進行10個樣本檢測。2.4

    體外免疫活性實驗(MTT 實驗法)

    ①受試樣品的制備將10mg 茉莉花脫腦油于2mL 50%乙醇中溶解,超聲5min ,然后用蒸餾水將茉莉花脫腦油和茉莉花提取物B -Ⅱ逐級稀釋成4個不同的濃度,備用。每個濃度各設1個陰性對照孔。

    [8]

    ②MTT 實驗將制備好的小鼠脾淋巴細胞懸液分別加入96孔細胞培養板中(100μL /well),再加入各濃度梯度受試樣

    Figure 2.The effect of jasmine tea (JT )extract on the transfor-ming rate of spleen lymphocytes.x ? s.n =10.*P <珋

    0. 05vs control group.

    圖22

    茉莉花茶浸出液對脾淋巴細胞轉化率的影響MTT 實驗結果

    每個濃度2個復孔。于37? 含5%CO 2的培養箱品20μL ,

    中培養36h 后加入RPMI -1640培養液(100μL /well )繼續

    4個濃度的B -Ⅱ和茉莉花脫腦油均可能有促進小鼠淋巴細胞增長的作用,但與對照組相比無顯著差異,且與濃度2。無線性關系,見表1、

    表1茉莉花提取物B -Ⅱ對體外培養小鼠淋巴細胞活力的影響

    Table 1.Effect of jasmine extract B -Ⅱon viability of cultured mouse lymphocytes (A value.x ? s.n =10)珋Group Control B -Ⅱ

    500mg /L0.077? 0.0270.262? 0.043

    250mg /L-0.090? 0.1300.200? 0.016

    125mg /L0.061? 0.0140.153? 0.021

    50mg /L0.383? 0.4530.194? 0.003

    ·1430·

    表2

    Group

    Jasmine essential oil Control

    400mg /L0.110? 0.0650.031? 0.051

    茉莉花脫腦油對小鼠淋巴細胞活力的影響

    200mg /L0.145? 0.1120.071? 0.033

    100mg /L0.165? 0.0740.096? 0.152

    50mg /L0.128? 0.0920.059? 0.120

    Table 2.Effect of jasmine essential oil on viability of cultured mouse lymphocytes (x ? s.n =10)珋

    討論

    現茉莉花脫腦油和B -Ⅱ均可能促進淋巴細胞生長,對增強免疫活性有一定作用,但本實驗中4個不同濃度的脫腦油和B -Ⅱ的結果都不是很明顯。這可能有以下主要原因:一是實驗鼠的個體差異,從每只鼠的脾臟中提取的淋巴細胞數相差過大;二是實驗例數不夠,有待今后工作中作進一步的研究。

    (致謝:本研究得到廣西醫科大學病理生理學教研室及化學教研室的大力支持,何薇、伍國俊、劉國萍、陸璐、覃志乾)等提供材料,特此致謝。

    [參

    獻]

    目前已從茉莉花花蕾乙醇提取物的乙酸乙酯和水溶液中分離獲得9個化合物,通過波譜分析并與已知化合物的數據對照,分別鑒定為:芐基-O -β-D -葡萄吡喃糖甙、芐基-O -β-D -木吡喃糖基(1→6)-β-D -葡萄吡喃糖、te-traol 、molihuaoside D 、sambacoside A 、sambacoside E 、蘆?。╮u-tin )、山奈酚-3-O -α-L -鼠李吡喃糖基(1→2)[α-L -鼠李吡喃糖基(1→6)]-β-D -半乳吡喃糖甙和槲皮素-3-O -α-L -鼠李吡喃糖基(1→2)[α-L -鼠李吡喃糖基(1

    [7]

    →6)]-β-D -半乳吡喃糖甙。本實驗通過在反應體系

    中加入不同濃度茉莉花茶浸出液,并與生理鹽水組進行對照發現,直接將茉莉花茶浸出液加入中性粒細胞吞噬細菌的反應體系中,并不能顯著影響中性粒細胞吞噬細菌的能力,其吞噬率與對照組差異不顯著,均在70%-80%范圍左右變動。但對于脾淋巴細胞轉化率,茉莉花茶浸出液在較高濃度(原液稀釋了1/5和1/10)情況下均可以顯著提高脾淋巴細胞轉化率,提示茉莉花茶浸出液可以促進PHA 誘導脾淋巴細胞增殖。從免疫學角度分析,中性粒細胞吞噬細菌是機體非特異性免疫,是抵御細菌入侵的第一道防線,而淋巴細胞轉細胞免疫是機體抗菌、抗病毒化率是反映細胞免疫的指標,

    以及抗腫瘤的重要特異性免疫防御系統,是機體調控免疫反應的中樞部分。本實驗發現茉莉花茶浸出液可以直接促進脾淋巴細胞增殖,提示茉莉花茶可以通過調節細胞免疫來提但不能直接促進中性粒細胞吞噬細高機體的免疫防御功能,

    菌。因此,對于特異性免疫而言,茉莉花茶中的相關組分有一定調節效應,值得進一步研究?;逭C庖吖δ芤覽滌詬髦置庖呦赴跋赴淶南嗷プ饔?。其中T 淋巴細胞和B 淋巴細胞又稱為免疫活性淋巴細胞,主要定居于脾臟和淋巴結等外周淋巴器官中,是特異性免疫應答的主要細胞。MTT 法可以檢測細胞存活和生長,其原理是活細胞內線粒體脫氫酶能將四氮唑化物(MTT )由黃色還原為藍色的甲臜(formazan ),后者溶于有機溶劑(如二甲基亞砜、無水乙醇或酸化異丙醇等),產量與活細胞數成正比。通過酶標儀檢測吸光度值來判斷細胞內線粒體氧化酶活性,亦可間接反映細胞的增殖水平。T 淋巴細胞轉化增殖程度可反映藥物對細胞免疫功能的影響

    [9]

    [1]Zhang A ,Zhu QY ,Luk YS ,et al.Inhibitory effects of

    jasmine green tea epicatechin isomers on free radical -in-J ].Life Sci ,1997,61(4):duced lysis of red blood cells [383-394.

    [2]Kolanjiappan K ,Manoharan S.Chemopreventive efficacy

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    epicatechins are hypolipidemic in hamsters (Mesocricetus auratus )fed a high fat diet [J ].J Nutr ,1999,129(6):1094-1101.[5]張曉剛,陳運貞,雷

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    2002.1426.衛生出版社,

    。茉莉花脫腦油和B -Ⅱ(是用改良快速

    低壓干柱柱層析法從茉莉花中分離純化獲得的白色粉狀結晶化合物)在茉莉花中含量較高,通過體外免疫活性實驗發

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